WGA

WGA

WGA 染色通常指的是利用小麦胚芽凝集素(Wheat Germ Agglutinin,WGA)进行的染色。

WGA 染色通常指的是利用小麦胚芽凝集素(Wheat Germ Agglutinin,WGA)进行的染色。

 

WGA 是从谷物中提取的一种蛋白质,它可以特异性地结合细胞膜上的 N-乙酰基-β-D-葡糖胺基残基和 N-乙酰基-β-D-葡糖胺低聚物。

 

实验步骤:

脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中浸泡一定时间,再经过无水乙醇Ⅰ、95%酒精、85%酒精等梯度处理,最后用蒸馏水洗。

抗原修复:将组织切片置于盛满 EDTA 抗原修复缓冲液(pH8.0)的修复盒中,于微波炉内进行抗原修复。

染色:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈,圈内滴加稀释好的 WGA 染液,在避光恒温箱中 37°C 孵育 30 分钟。

复染细胞核:将玻片置于 PBS(pH7.4)中洗涤,然后滴加 DAPI 染液,避光室温孵育 10 分钟,再用 PBS 洗涤。

封片:切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

镜检拍照:在荧光显微镜下观察并采集图像,WGA 阳性通常呈红色,细胞核呈蓝色。

 

注意事项:

控制好 WGA 染色液的浓度和孵育时间,以避免过度染色或染色不足。不同的实验材料和目的可能需要优化浓度和时间。

确保实验过程中所用的试剂和溶液的质量,以及实验器具的洁净。

严格按照操作步骤进行,特别是抗原修复的条件要准确控制。

注意避光操作,以防止荧光物质的淬灭。

在染色前,要保证样品处理的充分和均匀,例如切片的厚度应适中且均匀。

 

WGA 染色广泛应用于细胞生物学研究,可以用于标记和观察各种细胞类型的细胞膜,包括哺乳动物细胞、微生物和植物细胞等。通过 WGA 染色,能够清晰地观察到细胞膜、细胞核、细胞器和细胞间相互作用等,帮助深入了解细胞结构和功能。此外,在心肌细胞研究中,可用于分析心肌细胞是否肥大。