悬尾试验

悬尾试验

评价抗抑郁药物、兴奋药物、镇静药物药效的方法 悬尾实验(Tail suspension test, TST)是一种经典而又能快速评价抗抑郁药物、兴奋药物、镇静药物药效的方法。其原理是利用小鼠悬尾后企图逃脱但又无法逃脱,从而放弃挣扎,进入特有的抑郁不动状态,实验过程中记录动物不动时间来反映抑郁状态,抗抑郁药物、兴奋药物能明显地缩短改变其状态。

实验原理
悬尾实验(The Tail Suspension Test,TST)是一项小鼠行为测试,可用于筛选潜在的抗抑郁物,以及评估预期会影响抑郁相关行为的实验方法。

将实验动物通过固定动物尾部使其头向下悬挂,动物在该环境中拼命挣扎试图逃跑又无法逃脱,从而提供了一个无可回避的压迫环境,一段时间的实验后, 记录处于该环境的动物产生绝望的不动状态过程中的一系列参数,动物的表现出的这种典型的“不动状态”,反映了一种被称之为“行为绝望状态”,这种行为绝望模型与抑郁症类似,而且对绝大多数抗抑郁物敏感,而且其药效与临床药效显著相关,所以被广泛用于抗抑郁物的初选。

 

实验方法及注意事项
TST 悬尾实验不建议用较重的大鼠,因为大鼠只能通过它们的尾巴来支持它们的体重,这对大鼠来说是痛苦的。同样的道理,应该注意避免使用异常重的小鼠(例如用于模拟肥胖的小鼠),在这种情况下,实验者应该寻找替代性的测试,例如强迫游泳实验。
动物从居住环境带入实验环境应适应一段时间,通常至少一个小时。
实验环境应保持安静,突然大的噪音会使小鼠惊慌失措。
使用软件分析时,选择较佳对比度的背景:白鼠使用黑色背景,黑鼠使用白色背景;对老鼠的颜色没有要求,更可拍摄出高质量,高对比度的实验录像。

每只小鼠的实验空间多大?参考空间在 55 高*15 宽*11.5 cm 左右,多通量实验时,为防止动物彼此观察或互相影响,中间用隔板隔开;动物悬挂在隔间中间,宽度和深度足够大,不能与墙壁接触。
悬挂后动物鼻尖与设备地板之前的距离多少?参考距离在 20~25 cm 左右。
底部建议放置一个可拆卸的拖盘,收集粪便或尿液。

悬挂用的胶带应牢固地粘贴在小鼠尾部和悬挂杆上,并且足够坚固以承受正在测试的小鼠的重量。但是,胶带不应该过于粘滞,因为在实验结束会从尾部移除。胶带尺寸应统一,长度 17 厘米,从一端 2 厘米做标记。这个 2 厘米的部分用于将胶带连接到尾部,而剩余的 15 厘米用于悬挂小鼠;胶带应贴在尾部的尾端,尾部留 2-3 毫米的距离。

尾巴攀爬阻止器,小鼠在实验过程,会出现追求和攀爬它们自己的尾巴的现象,这是个普遍的问题。解决方法很简单,而且非常有效:将一段塑料管切成 4 cm 长中空圆柱体(内径 1.3 cm 左右,1.5 g)放置在小鼠尾巴周围就能防止这种尾巴爬行行为。注意的是,在没有使用阻止器之前,已经成功爬上尾巴的小鼠知道逃生是可能的。因此应将这类小鼠排除。

分析时仅有前肢但没有后肢介入的小动作可判断为不动;因惯性产生的摆动可判断为不动;


将实验动物的尾部进行固定,使其头部向下悬挂,动物在该环境中挣扎,企图摆脱该困境,在经过努力仍无法摆脱后,出现间断性不动,显示“行为绝望”状态。动物在该环境中拼命挣扎试图逃跑又无法逃脱,从而提供了一个无可回避的压迫环境,一段时间的实验后,记录处于该环境的动物产生绝望的不动状态过程中的一系列参数,动物的表现出的这种典型的“不动状态”,反映了一种被称之为“行为绝望状态”,这种行为绝望模型与抑郁症类似,而且对绝大多数抗抑郁药物敏感,而且其药效与临床药效显著相关,所以被广泛用于抗抑郁药物的初选。

有专门的悬尾测试仪,主要用于抗抑郁、镇静以及止痛类药物的研究。该仪器适用于大鼠小鼠或其他实验室动物,通过固定动物尾部使其头向下悬挂,记录处于该环境的动物产生绝望的不动状态过程中的一系列参数。

方法之一:将小鼠尾部后1/3处用胶带固定,悬挂于支架上,头部距离台面15cm,进行摄像,摄像背景与小鼠毛色呈明显反差,白色小鼠采用黑色背景。计时6min后停止,利用小动物行为学分析软件:用Smart 2.5软件对小鼠后四分钟(3-6min)的不动时间进行统计。